辣根过氧化酶使试剂中的发光物（luminol）氧化并发光，而试剂中含有增强剂这使得发光增强了1000倍。在免疫印迹中，将复杂的蛋白混合物经sds-page分离，并转移到固相膜上（如nc、pvdf）等，用于免疫学检测，经HRP标记的抗体与膜上的蛋白直接（标记一抗）或间接（标记二抗）反应。当加入免疫印迹化学发光试剂后，luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经x光胶片(放射自显影片)感光记录下来。
