引物是一段短的单链RNA或DNA片段,可结合在核酸链上与之互补的区域回,其功能是作为核苷酸答聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3′端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。
PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。
扩展资料
引物有多种设计方法,由PCR在实验中的目的决定,但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源:Taq和Pfu,分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。
模板即扩增用的DNA,可以是任何来源,但有两个原则,第一纯度必须较高,第二浓度不能太高以免抑制。
参考资料来源:百度百科-聚合酶链式反应
引物就是为了增幅目的DNA而导入的短小DNA片断,在PCR反应中,新合成的DNA是要接在引物上才能继续按照模版DNA复制.引物的设计因需要增幅的序列而不同.举个例子来说,你要增幅如下序列:
accctcccgccccccccgtat
(互补碱基不写了)
那么一般来说,你就要导入以accctc结尾的引物使得增幅继续下去,具体方法和注意事项楼主可以看gee_an大侠的资料.
查了一下测序公司的网页,如果要同定微生物,楼主需要准备如下东东:
1、待测菌体.试管或培养皿都可以,但必须是纯粹的待测菌体,不能含有其他的微生物.
2、提纯的DNA.如果1有致病性或传染性,那么楼主就得自己提纯DNA再交给测序公司.DNA纯度要求可以做PCR.
一般PCR使用两条引物,前后各一条,与模版DNA结合上后,前后的引物形成复制起始位点,共同向中间扩增,直到连上,一次扩增完成。