叶绿体分离的实验原理是什么?在分离叶绿体时应注意些什么问题?

将植物组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状、稠密度，也与离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。

然后在3000 r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。分离过程最好在0～4℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。

将植物组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法.一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状、稠密度,也与离心力以及悬浮介质的粘度有关.在一给定的离心场中,同一时间内,密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同.依次增加离心力和离心时间,就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部,分批收集即可获得各种亚细胞组分.叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L 氯化钠或0.4mol/L 蔗糖溶液)中进行,以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤.将匀浆液在1000 r/min 的条件下离心2min,以去除其中的组织残渣和一些末被破碎的完整细胞.然后在3000 r/min的条件下离心5min,即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核).分离过程最好在0～4℃的条件下进行；如果在室温下,要迅速分离和观察

提取：（1） 取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片（2g左右），洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放入e68a843231313335323631343130323136353331333332643238研。（2） 研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2-3ml 95％乙醇，研磨至糊状，再加10-15ml 95％乙醇，离心35min，提取上清液过滤于三角瓶中，残渣用10ml 95％乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。（3） 如无新鲜叶片，也可用事先制好的叶干粉提取。取新鲜叶片（以菠菜叶最好），先用105℃杀青，再在80℃下烘干，研成粉末，密闭储存。用时称叶粉2g放入小烧杯中，加95％乙醇20-30ml 浸提，并随时搅动。待乙醇呈深绿色时，滤出浸提液备用。分离：（1） 取圆形定性滤纸一张（直径11cm），将其剪成滤纸条（9cm×3cm），用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液，沿纸条的长度方向涂在纸条的一边（距边约1cm），使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，再重复操作数次。 （2） 在层析缸中加入适量的推动剂，将滤纸条带有色素的一端插入层析缸中，使滤纸条下端浸入推动剂