其实简单一点,可以直接克隆到表达载体上,送去测序确定之后再表达；我们以前一直这么做的；但是有些情况下,比如表达载体不是诱导型的,或者表达的蛋白对大肠杆菌宿主菌毒性很大,影响菌的生长,导致菌生长困难、提质粒困难等等,就会先克隆到一个克隆载体上面,做测序确定；然后再克隆到表达载体上.
通常来说我不太喜欢做两次克隆,总是酶切转化筛选；我喜欢选控制比较严谨的可调控性原核表达载体,比如pET系列的多个载体,直接把目的基因克隆上去.
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