1.可能是电压不稳,凝胶中间比两边更热,降压可缓解,你可尝试用跑积层胶的电压(你是用70V)一直跑到底,不必调到90V。
2.上样的时候,Marker尽量上在中间,Marker两边的样品尽量大小一致,就是说,有时样品的蛋白含量少(如作对照),平衡在M两边。加样量也有关系,加样不要太多,盐浓度不要过高。10mm梳子,10个孔的,20ul足够;10mm梳子,15个孔的,
12ul足够。还有,加样时,上样枪头不要碰到上样孔,加样时务必小心。
3.配胶时要混匀,待胶完全干燥时才可拔梳子,以免带出部分积层胶。