要求不是很严格吧,随机添加就可以了,鉴于含有GGCC,可以多加TA。因为基因序列内部的酶切位点,两侧的序列也没有严格的要求,只要Re有停留的位置就可以了,个人觉得。
人为引物需要导入酶切位点最终是用来切开的,但由于PCR扩后位点太边缘,切不开,PCR引物一般用DNA,用核苷酸转移酶即可(DNA液相合成),注意嘌呤嘧啶比例。