扫描电镜(Scanning Electron Microscope,简称SEM)是一种用于观察微观结构的重要分析仪器,其原理主要基于电子与物质的相互作用,具体如下:
1、电子束产生与聚焦
- 电子枪发射电子:扫描电镜中的电子枪通过热发射或场发射的方式产生电子束。在热发射电子枪中,通常使用钨丝或六硼化镧等材料作为阴极,通过加热使阴极中的电子获得足够的能量逸出表面,形成电子束。场发射电子枪则是利用强电场使阴极表面的电子隧穿而出,产生电子束。场发射电子枪产生的电子束具有更高的亮度和更小的束斑尺寸,能够提供更高的分辨率。
- 电子光学系统聚焦:产生的电子束通过由电磁透镜组成的电子光学系统进行聚焦和加速。电磁透镜利用磁场对电子的作用力,使电子束汇聚成一个非常小的束斑,通常可以达到纳米级的尺寸。同时,通过在电子枪和样品之间施加高电压,使电子束获得较高的能量,一般加速电压在1kV至30kV之间。
2、电子束与样品相互作用
- 产生信号:当具有一定能量的电子束轰击样品表面时,会与样品中的原子发生相互作用,产生多种信号,包括二次电子、背散射电子、特征X射线、俄歇电子等。
- 二次电子:是由入射电子与样品原子中的外层电子相互作用,使外层电子逸出样品表面而产生的。二次电子的能量较低,一般在50eV以下,其产额与样品表面的形貌和成分有关,对样品表面的细节非常敏感,主要用于观察样品的表面形貌。
- 背散射电子:是入射电子与样品原子发生弹性散射或非弹性散射后,部分电子从样品表面反射回来的电子。背散射电子的能量较高,与入射电子的能量相近,其产额与样品的原子序数有关,原子序数越大,背散射电子的产额越高,常用于分析样品的成分分布和晶体结构。
- 特征X射线:当入射电子将样品原子中的内层电子激发出来后,原子的内层会出现空位,外层电子会跃迁到内层空位,同时释放出具有特定能量的X射线,这种X射线称为特征X射线。每种元素都有其独特的特征X射线能量,通过检测特征X射线的能量和强度,可以进行样品的元素分析。
- 俄歇电子:当原子内层电子被激发形成空位后,外层电子跃迁到内层空位时,多余的能量可能会使另一个外层电子发射出来,这种电子称为俄歇电子。俄歇电子的能量与样品的元素种类和化学环境有关,可用于表面成分分析和化学态研究。
3、信号收集与处理
- 探测器收集信号:针对不同的信号,扫描电镜配备了相应的探测器。例如,二次电子探测器通常采用闪烁体-光电倍增管系统,将二次电子转化为光信号,再通过光电倍增管将光信号放大并转化为电信号。背散射电子探测器一般利用半导体探测器或闪烁体探测器来收集背散射电子信号。
- 信号处理与成像:探测器收集到的电信号经过放大、处理后,被传输到计算机控制系统。计算机根据信号的强度和位置信息,将其转换为图像上的像素点亮度或颜色,从而形成样品的扫描电镜图像。在扫描过程中,电子束按照一定的扫描模式(如光栅扫描)在样品表面逐点扫描,每个扫描点对应的信号强度就决定了图像中该点的亮度或颜色,最终形成反映样品表面形貌、成分等信息的二维图像。
原理如下;
一、透射电子显微镜
透射电镜即透射电子显微镜通常称作电子显微镜或电镜,是使用最为广泛的一类电镜。
1、工作原理:在真空条件下,电子束经高压加速后,穿透样品时形成散射电子和透射电子,它们在电磁透镜的作用下在荧光屏上成像。电子束投射到样品时,可随组织构成成分的密度不同而发生相应的电子发射,如电子束投射到质量大的结构时,电子被散射的多,因此投射到荧光屏上的电子少而呈暗像,电子照片上则呈黑色。
2、主要优点:分辨率高,可用来观察组织和细胞内部的超微结构以及微生物和生物大分子的全貌。
二、扫描电镜
扫描电镜即扫描电子显微镜,主要用于观察样品的表面形貌、割裂面结构、管腔内表面的结构等。
1、工作原理:扫描电镜是利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态。用极细的电子束在样品表面扫描,激发样品表面放出二次电子,将产生的二次电子用特制的探测器收集,形成电信号运送到显像管,在荧光屏上显示物体。(细胞、组织)表面的立体构像,可摄制成照片。
2、主要优点:景深长,所获得的图像立体感强,可用来观察生物样品的各种形貌特征。