所用样品放在冰盒中,因为超声破碎会发大量的热,如果温度过高会使蛋白变性,设置功率,超4秒,停8秒,看你量的决定超的循环数,一般100次足够了。
要提蛋白的话不能说是用什么过滤,而是离心。
不知道楼上说的超声15秒能破碎多少细胞,反正我看没戏。
离心的话8000rpm就可以 ,当然看你提什么蛋白了,如果某一种蛋白的话,还学要做电泳之类的才可以彻底分开。
千万不要听楼上的,尤其是第二步,如果你辛辛苦苦提的蛋白给煮沸了,那蛋白不就变形了吗? 你的工作就都白做了。
这个问题太简单了吧,呵呵。
用离心的方法去除杂质。有离心机吧?高速离心机20度20000g离心30分钟,取上清,杂质沉淀在离心管管底。具体过程如下:
1.超声:超0.2秒停2秒,超声15秒,样品放在冰上进行;如果超声后细胞提取液还浑浊不清,可重复以上步骤一次
2.煮沸10分钟,室温放置30分钟
3.按前面说的条件离心
祝好运!
离心最好在4度的环境下,离心液会产热的~~~
离心速度和时间不够