血清谷丙转氨酶底物液测定管与对照管底物加入顺序为什么不同

血清谷丙转氨酶活力的测定

1．原理：
在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。此过程可用下式表示：

苯腙在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439—530nm，因此在波长520nm处吸光度度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α-酮戊二酸的摩尔比基本呈线性关系，故可藉以测定谷丙转氨酶的活力。
2． 器材与试剂：
试管架，微量进样器，洗耳球，分光光度计，水浴锅，移液管
牛血清，谷丙转氨酶底物，2,4-二硝基苯肼，氢氧化钠（0.4mol/ L），标准丙酮酸（500μg/ml）
3． 操作：
取6支试管，按下表操作：
测定管（A） 标准管（S） 对照管（B） 空白管
底物（ml） 0.5 0.5
37℃水浴5min
牛血清0.1ml 丙酮酸0.1ml 牛血清0.1ml 水0.1ml
混匀后，37℃水浴准确保温30min
2,4-二硝基苯肼（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5
底物（ml） 0.5 0.5
混匀后，37℃水浴准确保温20min
NaOH（ml） 5.0 5.0 5.0 5.0

混匀后，静置10min，在520nm下比色，读取A、B、S管的吸光度值。
4．注意事项：
1． 酶在37℃下与底物作用30min后，以能产生2.5μg的丙酮酸为一个活力单位。
2． α-酮戊二酸也能产生苯腙，但在520nm下远较丙酮酸的低。
3． α-酮戊二酸和2,4-二硝基苯肼对显色有一定干扰，注意添加量。
5． 结果与分析：计算谷丙转氨酶活力。

（A—B）×500 A—B
谷丙转氨酶活力 = = ×200
S×2.5 S